Імунний блот
В даний час для підтвердження специфічності первинного позитивного результату найчастіше використовується метод імунного блоттинга - Western blot.
Зміст
Відео: А.С. Авдонина - Застосування методу імунного блоттинга в діагностиці цитомегаловірусної інфекції
Що таке імунна блот
Відео: Western Blotting
Принцип методу полягає у виявленні антитіл до певних білків вірусу, іммобілізованим на нітроцелюлозну мембрану. В організмі людини утворюються антитіла до ряду компонентів вірусу, дані про ці антигени наводяться в таблиці.
Підготовка нітроцелюлозних мембран для тест-системи проводиться таким чином. На першому етапі проводять поділ білків вірусу імунодефіциту людини за молекулярною вагою за допомогою електрофорезу в поліакриламідному гелі. Білки мігрують в шарах гелю при накладенні електричного потенціалу: білки з низькою молекулярною вагою проходять через пори в поліакриламідному гелі легше, ніж білки з високою молекулярною вагою і швидше досягають кінця гелю. В результаті цього відбувається поділ білків на окремі смуги по молекулярному вазі. Потім здійснюється електрофоретичний перенесення з поліакріламідного гелю на поверхню нітроцелюлозній мембрани. Після цього мембрана обробляється блокуючим розчином, щоб уникнути неспецифічного зв`язування імуноглобулінів сироваток крові, потім відмивається, висушується і розрізається на окремі смужки, які вкладаються в набір. Перенесені таким чином білки виявляються на нітроцелюлозній репліці (блоці) за допомогою непрямого аналізу, а саме: сироватка або плазма инкубируются з блотом- якщо досліджуваний матеріал містить антитіла до білків ВІЛ, вони зв`язуються з антигеном, перенесеним на нітроцелюлозну мембрану, після відмивання смужки блоту инкубируются з кон`югатом- при утворенні комплексу антиген-антитіло, кон`югат приєднується до нього, після відмивання від кон`югату і інкубації з субстратом відбувається фарбування тих ділянок нітроцелюлози, де відбу про утворення комплексу антиген-антитіло-кон`югат. Отриманий результат порівнюється з результатами тестування позитивної та негативної контрольних сироваток.
Відео: Western blotting technique | principle and step by step procedure
результати аналізу
Результати, отримані в імунній блоттинга інтерпретуються як позитивні, сумнівні і негативні.
